Resumo

Objetivos: A dopamina, importante neurotransmissor da família das catecolaminas, está envolvida no controle cerebral dos movimentos musculares e sua deficiência na doença de Parkinson causa perda da habilidade motora. A dopamina é abundante na retina e relacionada a funções importantes como adaptação à luz e regulação das junções gap entre células amácrinas. Além disso, vários subtipos de receptores de dopamina foram descritos na retina, incluindo receptores acoplados à adenilil ciclase. A Src é uma família de tirosina-cinases citoplasmáticas moduladoras de várias vias de sinalização que controlam o crescimento e diferenciação celular em resposta à ativação de diversos receptores, incluindo receptores acoplados à proteína G. O objetivo desse trabalho foi estudar a regulação da fosfoforilação da Src por dopamina em culturas de células de retina de pinto, investigando os receptores e vias de sinalização envolvidas nessa função. Métodos: Foram utilizadas culturas mistas contendo neurônios e células gliais da retina de embriões de galinha de oito dias de desenvolvimento incubadas por 3 dias. As culturas foram submetidas a diversos tratamentos com agonistas e antagonistas dopaminérgicos e a análise dos níveis de fosfo-Src (pSrc) foi feita por western blotting. Resultados: Inicialmente analisamos a cinética de tempo do efeito da dopamina (50 μM) sobre o nível de pSrc (tyr416). Após 5 minutos de incubação, ocorreu uma pequena diminuição do nível de pSrc em relação ao nível controle (16,8±3,1%; n=6). O efeito inibitório atingiu o máximo em 30 minutos (43,6±13,4%; n=5) e permaneceu constante até 90 minutos de incubação com dopamina (41,4±15,7%; n=6). Para verificar a participação do subtipo D1 de receptor dopaminérgico neste efeito, realizamos experimentos similares com o agonista seletivo SKF 38393. A cinética de diminuição dos níveis de pSrc induzida por SKF 38393 foi semelhante à da dopamina, com inibição máxima ocorrendo em 30 minutos. No entanto, um menor nível de inibição foi observado (23,8±6,2%; n=5), indicando ser um efeito mediado principalmente pelo receptor D1, mas não descartando a participação de outros subtipos de receptor. O antagonista D1, SCH 23390, bloqueou completamente o efeito mediado pelo SKF 38393 (2,7±8,4%; n=5).