Resumo

Objetivos: O ascorbato (Asc), além de atuar como anti-oxidante, desempenha papéis fundamentais na amidação de peptídeos, na formação de mielina, em atividades sinápticas e na proteção contra a toxicidade do glutamato. A dopamina é um importante neurotransmissor envolvido no controle motor, mecanismos de recompensa e funções endócrinas, além de atuar juntamente com o glutamato em mecanismos de memória e cognição. Nosso objetivo neste trabalho foi investigar se a dopamina é capaz de modular a liberação de Asc em culturas de células de retina de embriões de galinha e estudar quais os receptores e vias de sinalização envolvidos nessa função. Métodos: Culturas foram preparadas a partir das retinas do oitavo dia desenvolvimento (E8) que foram dissecadas, dissociadas química e mecanicamente e as células plaqueadas e incubadas a 37ºC. O meio foi trocado após um dia em cultura e os ensaios de liberação realizados em três ou quatro dias de cultura. As culturas foram pré-incubadas com [14C] Ascorbato por 40 minutos, lavadas quatro vezes por três minutos com salina Hank’s. Após 10 minutos de incubação, foi recolhido o primeiro volume (basal1). Em seguida as células foram incubadas na presença ou ausência dos antagonistas por mais 10 minutos, quando foi recolhido o basal2. Uma posterior incubação por mais 10 minutos com os agonistas na presença ou não dos antagonistas foi realizada e o volume recolhido para obtenção do valor de estímulo. A atividade das amostras foi mensurada por cintilação líquida e os resultados normalizados a partir do basal. Resultados: Foi observado um aumento na liberação de Asc em culturas tratadas com diferentes concentrações de dopamina (10 nM -100 μM), com um valor máximo de 179,1± 11,6% (n=3) obtido na concentração de 100μM e um EC50 de 26,07 µM. Dopamina (50μM) promoveu um aumento na liberação de Asc (68,3±10,5%; n=10), semelhante ao observado com SKF38393 (10 μM), agonista do receptor D1 de dopamina (51,3±12,2%; n=6). Este aumento foi inibido na presença de SCH23390 (10μM), antagonista do receptor D1 (16,9±7,1%; n=3). Quinpirole (10μM), agonista do receptor D2, assim como butaclamol (10μM), antagonista do receptor D2, não tiveram efeito na liberação de Asc (-1,7±4,5%; n=5 e 16,0±15,65%; n=3, respectivamente). Como o receptor D1 está acoplado positivamente à adenilil ciclase, investigamos se esta via estaria envolvida na liberação de Asc por dopamina. Forskolina, ativador direto da adenilil ciclase, promoveu uma estimulação da liberação de Asc. (50,9±17,7%; n=5), o mesmo ocorrendo com 8-Bromo-AMPc, um análogo permeável do AMPc (58,6±9,54%; n=4). Culturas previamente estimuladas com dopamina foram capazes de responder a um novo período de tratamento com dopamina. Nestas culturas, um primeiro tratamento com dopamina (50μM) estimulou a liberação de Asc em 54,7±11,9% (n=3). Após lavagem com Hank’s, um segundo tratamento com dopamina (50μM) estimulou a liberação em 115,9±21,3% (n=3). Conclusão: Os resultados indicam que a dopamina é capaz de estimular a liberação de Asc em células da retina em cultura via ativação do receptor D1 e ativação da adenilil-ciclase. Apoio Financeiro: CAPES/ CNPq/ FAPERJ/ PRONEX-MCT