Resumo

Introdução A D-serina é um co-agonista endógeno dos receptores de glutamato do tipo NMDA, que participa da comunicação celular no sistema nervoso. A enzima serina racemase (SR) forma D-serina a partir de L-serina. A proteína que interage com PKC-1 (PICK1) é capaz de se ligar à SR e regular os níveis de D-serina. Observamos previamente que a PKC fosforila a SR e reduz a disponibilidade de D-serina no sistema nervoso in vivo. A calcineurina é uma fosfatase que defosforila proteínas fosforiladas pela PKC. Objetivo Estudar o papel da fosfatase calcineurina no controle da fosforilação da SR e dos níveis de D-serina. Metodologia Estudamos culturas primárias de neurônios do córtex de embriões Wistar com 14 dias. Tais culturas foram tratadas com L-serina para estimular a produção de D-serina. A fosforilação da SR foi medida por imunodetecção e os níveis de D-serina foram monitorados por cromatografia de alta performance (HPLC). Resultados Primeiro observamos que a inibição inespecífica de fosfatases pelo ácido ocadáico reduz de forma significativa os níveis de D-serina em neurônios (n=3; P=0,001; t=3,94). Para estudar o papel específico da calcineurina inibimos seletivamente a calcineurina com ciclosporina A. Observamos que a inibição específica da calcineurina reduziu significativamente a concentração de D-serina nos neurônios (n=3; P=0,03; t=2,24) e aumentou em torno de 60% a fosforilação da SR em resíduos de serina (n=3; P=0,006; t=4,07). Conclusão Os resultados mostram que a atividade da calcineurina regula o estado de fosforilação da SR e a formação de D-serina em neurônios. Os próximos passos incluem estudar o papel da calcineurina na regulação da SR em astrócitos e in vivo.