Resumo

Introdução: O glutamato é o principal aminoácido excitatório do sistema nervoso central (SNC) de mamíferos onde exerce diferentes papéis na memória e aprendizado, proliferação e migração celular, sobrevivência e morte celular. Porém altas concentrações de glutamato no meio extracelular podem ser neurotóxicas devido hiperestimulação de receptores ionotrópicos, principalmente do tipo NMDA. Isto leva a um aumento da concentração de Ca+2 citosólico livre, o que pode resultar em morte neuronal. Diversos trabalhos têm demonstrado que a excitotoxicidade causada pela hiperestimulação de receptores NMDA depende da ativação de receptores com localização subcelular específica. A intensa ativação de receptores NMDA sinápticos promove a sobrevivência celular em neurônios hipocampais, visto que a estimulação de receptores extrasinápticos está ligada a morte por excitotoxicidade. Objetivo: Este trabalho objetiva investigar o perfil e o tipo de morte celular induzida pela ativação dos receptores NMDA em fatias de hipocampo e córtex de ratas adultas. Métodos: Foram utilizadas ratas Wistar de 60 dias (200 a 300g). Os animais foram decapitados e o cérebro removido em meio HBSS-HEPES, pH de 7.2. Foram obtidas fatias coronais de hipocampo e córtex (400 µM de espessura), as quais foram incubadas em meio HBSS na presença ou ausência de NMDA (100µM) durante 45, 90, 180 e 360 min. O perfil de morte celular foi avaliado pela quantificação da atividade da lactato desidrogenase (LDH) no meio extracelular, pelo ensaio de MTT e incorporação de iodeto de propídeo (IP). A dosagem de proteína foi realizada pelo método de Peterson. Resultados: Nas fatias controle, não observou-se variação significativa na atividade da lactato desidrogenase e na formação de MTT ao longo dos diferentes tempos de incubação. O tratamento com NMDA (100µM) levou a um aumento de aproximadamente 40% da atividade da LDH somente nas fatias de córtex no tempo de 360 min de incubação quando comparado ao controle (P<0.001). No entanto, não houve aumento significativo da atividade da LDH nas fatias de hipocampo tratadas com NMDA em nenhum dos tempos avaliados. As fatias de córtex incubadas com NMDA nos tempo de 180 e 360 min apresentaram aumento da incorporação de iodeto de propídio ao longo de toda a fatia. No entanto, o tratamento com NMDA induziu um aumento significativo da incorporação de iodeto de propídio nas regiões CA1, CA3 e giro denteado do hipocampo somente no tempo de 360 min. Conclusões: Nossos resultados indicam que a ativação prolongada in vitro de receptores NMDA induz um aumento significativo da morte celular em córtex e nas regiões CA1, CA3 e giro denteado do hipocampo de ratas adultas. Desta forma, novos estudos são necessários a fim de investigar os mecanismos moleculares e celulares, bem como o tipo e a localização subcelular dos receptores NMDA envolvidos neste processo.