Resumo

Introdução: O acúmulo de proteínas não enoveladas no interior do Retículo Endoplasmático (RE) caracteriza o Estresse de RE, levando à ativação da Resposta à Proteína Não Enovelada (UPR, do inglês Unfolded Protein Response). A UPR é um conjunto de vias de sinalização disparadas pelas proteínas sensores PERK, IRE1 e ATF6 a partir do RE. O Estresse de RE pode favorecer a sobrevivência ou a morte celular programada. Foi descrito que uma das vias da UPR, a via de IRE1, pode ativar a proteína cinase JNK. Verificamos previamente que a degeneração de células ganglionares da retina neonatal induzida por axotomia é bloqueada pelo inibidor de JNK. Um dos alvos da JNK é a proteína pró-apoptótica BH3-only Bim. A inibição da N-glicosilação de proteínas recém-sintetizadas no lúmen do RE leva ao acúmulo de proteína não enoveladas e à ativação da UPR. Verificamos previamente que o tratamento de explantes de retina com tunicamicina, um inibidor da N-glicosilação, induz Estresse de RE e ativa a UPR na retina, levando à morte celular programada na região da camada neuroblástica (NBL) e da camada nuclear interna (INL) de ratos com 6 dias pós-natal (P6). Objetivos: Neste trabalho, nosso objetivo foi testar o papel da via de JNK na morte celular induzida por Estresse de RE na Retina. Métodos: Explantes de retina de ratos com 6 dias pós-natal foram mantidos por até 24h in vitro na ausência e presença da droga inibidora de JNK SP600125, sendo utilizada isoladamente ou associada à tunicamicina. O conteúdo de Bim e do fator de transcrição CHOP/GADD153 que tem sua expressão induzida pela UPR foi examinado através de Western Blot. A morte celular programada foi avaliada através da contagem dos perfis condensados corados com vermelho eutro e da detecção de fragmentação de DNA in situ pela técnica de TUNEL. Resultados: Entre o intervalo de 6h e 24h de cultivo in vitro na presença de tunicamicina, há um grande aumento no número de células picnóticas e células TUNEL positivas, característica de morte celular programada na NBL e INL da retina. Por Western Blot, verificamos o aumento de CHOP e Bim em extratos proteicos de retinas tratadas com tunicamicina. Ao realizarmos o tratamento com SP600125, observamos uma grande redução no número de perfis picnóticos na NBL e INL. Conclusão: O indutor de Estresse de RE tunicamicina induz aumento do conteúdo de CHOP e de Bim na retina. Nosso resultados mostram que o Estresse de RE na retina ativa a via da UPR e induz morte celular dependente da atividade de JNK. Além disso, os resultados sugerem que a proteína pró-apoptótica Bim como um alvo da JNK nesse contexto.