SBNeC 2010
Resumo:B.093


Poster (Painel)
B.093EFEITOS DO FATOR DE CRESCIMENTO DO NERVO SOBRE A LIBERAÇÃO BASAL DE GLUTAMATO E COMPOSTOS TIÓIS NA RETINA DE EMBRIÃO DE GALINHA
Autores:Tarcyane Barata Garcia (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Edinaldo Rogério da Silva Moraes (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Alan Barroso Araújo Grisólia (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Karen Renata Matos Oliveira (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Maria Elena Crespo-lopez (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Domingos Luiz Wanderley Picanço-diniz (UFPA - Universidade Federal do Pará) ; Anderson Manoel Herculano Oliveira da Silva (UFPA - Universidade Federal do Pará)

Resumo

O Fator de Crescimento do Nervo (NGF) foi o primeiro membro a ser descoberto de uma família de fatores com a capacidade de impedir a morte neuronal, denominados neurotrofinas. Existem evidências consistentes indicando que NGF está envolvido na sobrevivência, desenvolvimento e funcionamento de células do sistema visual, incluindo as células da retina..Diversos estudos demontram que o glutamato está intimamente envolvido tanto com ventos de desenvolvimento quanto de morte celular na retina, assim, fatores que regulam a liberação de glutamato na ontogenia retiniana podem regular também a liberação de substâncias que protejam do eventual estresse oxidativo gerado pelo neurotransmissor. Dentro deste contexto, no presente trabalho pretendemos avaliar o efeito do NGF sobre a liberação de glutamato, bem como determinar se o NGF altera a liberação de compostos contendo grupamento –SH na retina de embrião de galinha. Embriões de galinha no décimo dia de desenvolvimento embrionário (E10) foram sacrificados por decaptação e os olhos foram enucleados. As retinas intactas foram incubadas em solução de Hank (controle) ou na mesma solução contendo diferentes concentrações de NGF (10 ng/ml, 50 ng/ml e 100 ng/ml) durante 30, 60 ou 120 minutos. Após cada tempo de incubação, o meio foi retirado e centrifugado. Foram usados 500 µl do sobrenadante para a determinação de glutamato endógeno por cromatografia líquida de alta eficácia (CLAE). Os níveis de compostos tióis foram determinados por ensaio colorimétrico, partindo-se do princípio que grupamentos –SH reagem com DTNB, resultando em um composto de coloração amarela que pode ser quantificado por espectrofotometria (416nm). A liberação basal de glutamato quantificada em diferentes tempos de incubação foi 6.57 ± 0.42 µM em 30 min, 9,83 ± 3,65 µM em 60 min e 10,11 ± 1,73 µM em 120 min. Trinta minutos após a administração de 10 ng/ml de NGF, o nível de glutamato no meio não foi significativamente alterado (6,53 ± 0.44 µM controle vs. 6,21 ± 1.79 µM), enquanto que NGF em uma concentração de 50 ng/ml aumentou significativamente o nível extracelular de glutamato (9,95 ± 0.29 µM). Em uma concentração maior de NGF (100 ng/ml), o nível de glutamtao no meio retornou aos níveis basais (6,71 ± 0.0 µM). Após 120 min de incubação, o efeito estimulante máximo de NGF sobre a liberação de glutamato foi observado na concentração de 10ng/ml (10,09 ± 1.69 µM control vs. 29,28 ± 3.43 µM). Quando a concentração de NGF foi aumentada (50 e 100 ng/ml), os níveis basais de glutamato foram recuperados (11,95 ± 2.93 µM e 13,40 ± 1.40 µM). Analisamos também o efeito do NGF sobre o acúmulo extracelular de compostos contendo grupamento –SH após 120 minutos de exposição ao NGF, e observamos um padrão similar àquele observado para o nível extracelular de glutamato após a administração de NGF (20,66 ± 0.34 nmol controle vs. 22,69 ± 2.98 nmol para 10 ng/ml NGF; 26,74 ± 0.45 nmol para 50 ng/ml NGF e 22,61 ± 0.57 nmol para 100 ng/ml NGF).O NGF é capaz de induzir um efeito concentração e tempo dendente na liberação de glutamato na retina, sendo este processo acompanhado por um aumento no nível extracelular de compostos contendo grupamentos sulfidrila. Nossos dados sugerem que a sinalização mediada pelo NGF no desenvolvimento retiniano envolve tanto ativação glutmatérgica quanto liberação de antioxidantes endógenos


Palavras-chave:  Glutamato, NGF, radical sulfidril, Retina