Resumo

O tratamento com PMA (acetato de forbol miristato), um ativador de PKC, diminui a proliferação de células da retina de ratos neonatos através de um efeito mediado pela ativação de receptores muscarínicos. Nossos resultados anteriores mostram ainda que o PMA diminui a expressão de receptores M1 na cultura e que essa mesma diminuição é observada com a diferenciação do tecido. O objetivo deste trabalho é analisar o efeito do PMA na proliferação e na modulação do fenótipo colinérgico das células da retina de ratos neonatos mantidas em cultura. Analisamos a influência desse tratamento sobre a expressão das proteínas reguladoras do ciclo celular (p53 e ciclina D1) e o perfil de expressão dos receptores muscarínicos do tipo M3 no desenvolvimento pós-natal do tecido e em culturas de células da retina tratadas com PMA por 48 horas. Ratos da linhagem Lister Hooded (P0-P2) foram sacrificados e suas retinas dissecadas em solução salina, tripsinizadas e dissociadas. As células foram plaqueadas em uma densidade de 100.000 células/cm2 em placas de Petri previamente tratadas com poli-L-ornitina e mantidas em meio de cultura (CT) ou tratadas com PMA, por 48h. O tecido íntegro também foi utilizado em diferentes idades (P0-P30) para a análise da expressão de receptores M3 ao longo do desenvolvimento. A avaliação da expressão de p53, ciclina D1 e do receptor M3 foi feita através da técnica de Western blot. Nossos resultados mostram que o tratamento com PMA (25 e 50ng/mL) em culturas de células da retina aumenta a expressão de receptores M3 (CT 100%, PMA25 122,12±8,3%, PMA50 202,47±15,81%, n= 3-4). Analisamos também o perfil da expressão desses receptores durante o desenvolvimento do tecido no período pós-natal e observamos que a diferenciação do tecido está acompanhada por um aumento na expressão dos receptores M3 (P0 100%, P4 83,69±3,9%, P7 119,12±5,9%, P14 155,17±4,0%, P30 166,8±17,8%, n=3-6). O tratamento com PMA aumenta a expressão da p53 (proteína inibidora do ciclo celular) (CT 100%, PMA25 144,87±11,3%, PMA50 173,29±18,8%, n=3-4) e diminui a expressão da ciclina D1 responsável pela progressão celular da fase G1 para a fase S (CT 100%, PMA25 89,78±4,6%, PMA50 46,77±4,2%, n=3-4). Nossos resultados sugerem que o efeito anti-proliferativo do PMA é mediado pelo aumento na expressão de p53 e diminuição na expressão de cilcina D1. E que a ativação crônica da PKC altera o padrão de expressão dos receptores M1 e M3 em cultura, mimetizando o que acontece durante a diferenciação pós-natal do tecido.