Resumo

O objetivo deste trabalho foi avaliar as vias de sinalização estimuladas pelo tratamento com interleucina-4 (IL-4) em células da retina de ratos. Ratos da linhagem Lister Hooded foram sacrificados e suas retinas dissecadas em solução salina. Em nossas experiências utilizamos tanto retinas intactas como culturas mistas de células da retina obtidas a partir de animais P0-P1. Para analisarmos a expressão de proteínas e ou ativação delas utilizamos a técnica de Western blot. Nas culturas utilizamos meio de cultura completo e uma densidade de plaqueamento de 2500000 células em placas de 40mm. As culturas foram tratadas com IL-4 por diferentes intervalos de tempo. Dados prévios do nosso laboratório indicam a participação do AMPc e da proteína cinase A no efeito trófico promovido pela IL-4 nas células ganglionares da retina mantidas em cultura. Baseados nestes resultados, avaliamos os níveis de CREB fosforilada após tratamento por 15 mim, com IL-4. Nossos resultados mostram que tanto culturas estimuladas com IL-4 50U/mL por 15 minutos (CT-100%, IL-4 50U/mL-229±9,13% n=3), quanto retinas intactas submetidas ao mesmo tratamento, apresentam um aumento nos níveis de CREB fosforilada após o tratamento com a IL-4 (CT-100%, IL-4 10U/mL-96,87±23,34%, IL-4 50U/mL-135,65±10,62%, IL-4 100U/mL-185,06±8,42%, forskolina-192,92±5,77% n=3). Paralelamente avaliamos os níveis de p-CREB ao longo do desenvolvimento da retina de ratos (P0-28362,33±2174,77, P4-4778,5±858,55, P7-3980±941,42, P15-21116±1817,10 n=3). Dados do nosso laboratório demonstram que o efeito trófico da IL-4 também depende da ativação dos receptores Trks (receptores catalíticos para as neurotrofinas). Para saber se há aumento na produção de neurotrofinas induzido pela IL-4, analisamos a expressão de BDNF em tecido tratado por 4 horas (CT-100%, IL-4 50U/mL-195,67±8,5%, IL-4 100U/mL-319,67±8,11 n=3) e em culturas tratadas por: 4 horas (CT-100%, IL-4 50U/mL-161,17±6,08% n=3), 24 horas (CT-100%, IL-4 50U/mL-140,01±9,52% n=3) e 48 horas (CT-100%, IL-4 50U/mL-137,21±2,93 n=3). Nossos dados nos permitem concluir que a IL-4 promove a fosforilação de CREB tanto em cultura quanto em tecido e também é capaz de promover o aumento na expressão de BDNF. Baseados nestes resultados, sugerimos que o efeito trófico da IL-4 nas células ganglionares seja mediado pelo BDNF.