Resumo

OBJETIVO: O ácido γ-aminobutírico (GABA) e o glutamato são respectivamente os principais neurotransmissores inibitório e excitatório no Sistema Nervoso Central (SNC) e são fundamentais para o processamento visual. Trabalhos prévios mostram que o glutamato induz liberação de GABA na retina, entretanto, os mecanismos associados a esta liberação não são totalmente esclarecidos. Estudos também apontam que compostos tióis regulam a liberação de GABA no hipocampo, mas pouco é conhecido sobre o efeito de tióis (-SH) sobre os níveis endógenos deste neurotransmissor na retina. A glutationa (GSH) é um dos mais importantes tióis, e no SNC parece exercer um papel neuromodulador na liberação de neurotransmissores. Dentro deste contexto, o objetivo deste trabalho foi analisar o possível efeito da GSH na liberação de GABA, além de determinar se o glutamato altera a liberação – SH na retina. MÉTODOS: Neste trabalho utilizamos como modelo experimental tecido retiniano íntegro de embrião de galinha, com sete ou oito dias de desenvolvimento, o qual preserva as conexões celulares do tecido. Para ensaios de liberação de GABA e glutamato, as retinas intactas foram tratadas com GSH (100 e 500 µM) por 15 minutos, e os níveis de GABA liberado para o meio extracelular foram quantificados por Cromatografia Líquida de Alta Eficácia (CLAE). Para ensaios de liberação de compostos tióis (–SH), as retinas foram incubadas com glutamato (100 µM) diluído em solução de Hank (com ou sem Na+) por 15 minutos, e os níveis extracelulares de – SH foram determinados pela reação com DTNB, a qual resulta em um composto amarelado que pode ser quantificado por espectrofotometria (416nm). Todos os experimentos foram realizados em triplicata e submetidos a testes estatísticos (Análise de Variância, seguido pelo teste Tukey). RESULTADOS: Nossos resultados demonstraram que o tratamento das retinas com glutamato a 50 e 500 µM resultou em um aumento significativo nos níveis extracelulares de GABA (3562±17 nM e 3536±12 nM, respectivamente) em relação ao controle (416±69 nM). O tratamento com Glutamato 100 µM também promoveu um significativo aumento de compostos contendo – SH em meio com sódio (0,62 ±0,02 u.a) e meio sem sódio (0,69 ±0,04), quando comparados à liberação basal (0,48±0,03 u.a). Como reconhecidamente a GSH representa o principal composto tiol no ambiente intracelular, procuramos estudar o efeito da GSH em nosso modelo experimental quanto à liberação de GABA. A incubação com GSH promoveu um aumento significativo na liberação de GABA de forma dependente da concentração (771 ±40 nM a 100 µM e 3142 ±350 nM a 500 µM) quando comparada ao controle (183 ±50 nM). Avaliamos também se o efeito observado poderia estar relacionado à liberação de Glutamato induzido por GSH. Nossos resultados demonstraram que nas mesmas condições de tratamento, GSH não induziu liberação de glutamato na retina. CONCLUSÕES: O glutamato é capaz de induzir tanto a liberação de GABA quanto de compostos com grupamentos sulfidrila na retina, sendo os últimos por um mecanismo independente de sódio, da mesma forma que glutationa promove significativa liberação de GABA sem alterar a liberação de Glutamato no meio. Considerando que a glutationa é o principal componente tiol transportável intracelularmente, o presente trabalho sugere uma possível participação deste tripeptídeo na liberação de GABA induzida por Glutamato na retina de embrião de galinha. INSTITUIÇÃO DE FOMENTO: CAPES, UFPA