Resumo

Dados prévios do nosso laboratório haviam demonstrado que o tratamento de culturas mistas de células da retina com IL-2, por 48h, induzia um aumento da sobrevida das células ganglionares de maneira dose – dependente. O melhor efeito foi obtido na concentração de 50U/mL (praticamente a inibição total do processo de morte celular). A ação da IL-2 foi bloqueada pelos inibidores de tirosina cinase e pelo inibidor seletivo da Jak3. Os objetivos do nosso trabalho foram analisar a participação da via do AMP cíclico no efeito da IL-2 e estudar a expressão desta interleucina no tecido retinado em diferentes idades pós-natais. Ratos Lister Hooded recém nascidos receberam injeções de HRP (30% em DMSO 2%) nos colículos superiores. Após 16 horas, os animais foram sacrificados, suas retinas dissecadas em solução salina sem cálcio e magnésio, dissociadas química e mecanicamente e plaqueadas em lamínulas tratadas previamente com p-L-o 25μg/mL, na densidade de 125.000 cél/cm2. As culturas foram mantidas por 4h em meio de cultura completo e após este período as lamínulas controle 4h, que correspondem a 100% da população de CG (±1000 céls/placa), foram fixadas em aldeídos. As demais receberam tratamento com IL-2 e/ou as drogas. Após 48h em cultura as lamínulas foram fixadas e a revelação da HRP foi feita por reação histoquímica, que utiliza a TMB como cromógeno. O n° de CG foi obtido por contagem em microscopia de campo claro com aumento de 400X. Nossos resultados demonstram que o efeito da IL-2 foi abolido pelo tratamento com o inibidor da adenilil ciclase (SQ 22536 na concentração de 1μM) [CT 48h 62,02±5,29% n=6, IL-2 95,83±7,25% n=4, SQ 22536 51,42±6,84%, IL-2+SQ 22536 57,79±9,98% n=11]. O inibidor da PKA (H89 11μM) também bloqueou o aumento da sobrevida nas células ganglionares da retina promovido pela IL-2 [CT 48h 57,56±3,24% n=6, IL-2 86,28±4,16% n=4, H89 47,32±7,47% n=5, IL-2+H89 56,82±3,85% n= 9]. A ausência do soro fetal bovino (SFB) no meio de cultura não inibiu o efeito da IL-2 [CT 48h 62,66±5,1% n=7, IL-2 95,10±5,9% n=8, CT 48-SFB 46,26±3,3% n=10, IL-2-SFB 87,86±4,49% n=7].