Resumo

Objetivo: Um número crescente de evidências indicam que durante a retinopatia diabética (RD) ocorrem disfunções precoces na retina neural, inclusive aumento da produção de óxido nítrico (NO). Na retina normal, o aumento da produção de NO pode modular a liberação de GABA (Vision Res. 20:2494, 2009). O objetivo deste trabalho é investigar se ocorrem alterações na transmissão GABAérgica durante a RD e se estas alterações estariam relacionadas ao aumento da produção de NO. Métodos: Pintos (White Leghorn) pós-eclosão foram injetados intraperitonealmente com STZ (24mg/Kg) ou com salina (controle). Após uma semana a glicose foi dosada e os animais foram sacrificados para remoção das retinas. Retinas foram preparadas para western blot a fim de detectar a expressão de proteínas nitradas utilizando o anticorpo contra nitrotirosina. Para imunohistoquímica, cortes radiais de retina (14µm) foram incubados com os seguintes anticorpos primários: x-GABA e x-GAT-1. Após incubação com anticorpos secundários, cortes foram incubados com ABC e em seguida com cromógeno DAB para análise ao microscópio óptico. Retinas foram incubadas com 100µM de DAF por 1h protegidas da luz, lavadas com tampão fosfato 0,16M e analisadas em microscópio de fluorescência. Resultados: Animais hiperglicêmicos apresentaram aumento na expressão de proteínas (20-30KD) nitradas (N=4, 169+14%), indicando um possível aumento na produção de NO. De acordo, dados preliminares, utilizando DAF como indicador da produção de NO, indicam um aumento no número de células DAF-positivas em retinas de ratos hiperglicêmicos (N=1, 246+53) comprados com o controle. Foi verificado aumento na imunorreatividade (IR) para GABA nas células amácrinas (N=3, 124+5), células horizontais (N=3, 200+39) e células da camada de células ganglionares (N=3, 118 ± 4). Houve uma tendência de redução do número de células marcadas para GAT-1(N=2, 60 ± 21). Conclusão: Mudanças fisiológicas ocorrem na retina já na 1ª semana de diabetes, como o aumento da nitração de proteínas e número de células DAF-positivas, que são indicadores do aumento dos níveis de NO intracelular. Foi verificado um aumento na marcação para GABA e uma diminuição na marcação para o GAT-1. Esses dados sugerem que a diminuição da expressão dos transportadores GAT-1 diminui a liberação de GABA. Estudos adicionais serão necessários para verificar se esta alteração da transmissão GABAérgica ocorre em função da alteração da produção de NO em células neurais na RD.