Resumo

Objetivos: Neste trabalho investigamos o papel da interleucina-4 (IL-4) no controle da proliferação celular induzida tanto pelo Fator de Crescimento de Fibroblastos básico (FGFb) como pelo Fator de Crescimento Epidermal (EGF) em células da retina de ratos neonatos. Métodos: Células da retina de ratos Lister Hooded recém nascidos (P0-P2) foram dissociadas e semeadas (1,25x10⁶céls) em placas de Petri (40mm) tratadas com poli-L-ornitina (25μg/mL). As culturas foram mantidas em meio de cultura 199 acrescido de 5% de soro fetal bovino numa atmosfera de 95% de ar e 5% de CO₂. A IL-4, o FGFb e o EGF foram adicionados em diferentes períodos de tempo e em diferentes concentrações. A proliferação celular foi avaliada por incorporação de [³H]-timidina e a radioatividade das amostras foi medida em cintilador de fase líquida. Para identificar o tipo celular que proliferava em culturas estimuladas com FGFb e EGF, as culturas foram tratadas com estes fatores e após 48horas, incubadas com Bromodeoxiuridina (BrdU) (15μM) por 3 horas em atmosfera com 5% de CO₂. Seqüêncialmente foi realizada imunocitoquímica para BrdU. Para analisarmos a expressão de FGFb na retina de ratos utilizamos a técnica de Western blot. Resultados: Nossos resultados demonstram que a pré-incubação com IL-4 50U/mL por 24h e estimulação posterior com FGFb 25ng/mL por 48h induziu um aumento de 50 no efeito proliferativo do FGFb [ct=100%; ct lavagem=91,43±3,7; FGFb=162,3±9,4; IL-4=85,79±4,9; FGFb/IL-4=164,8±24,6; IL-4/FGFb=257,03±41,3; n=6]. Quando as culturas foram co-estimuladas com IL-4 (50 U/mL) e com FGFb(5ng/mL e 15ng/mL) o efeito proliferativo do FGFb também foi potencializado em 50 e 100 respectivamente [ct=100%; FGF (5ng/mL)+IL4(50U/mL)=141,5±17,3;FGFb(15ng/mL)+IL4 (50U/mL)=229,8±34,6; n=9]. Um aumento superior a 150 foi obtido com o tratamento com IL-4 nas concentrações de 6,25, 12,5 e 25U/mL juntamente com FGFb (25ng/mL) [ct=100%; FGFb(25ng/mL)+IL-4(6,25U/mL)=199±8; FGFb(25ng/mL)+IL-4(12,5U/mL)=249,7±14,4; FGFb(25ng/mL)+IL-4(25U/mL)=294,7±15,3; n=7]. A estimulação das culturas com EGF (0,1ng/mL) aumentou a proliferação celular em aproximadamente 200%, no entanto, o tratamento com IL-4(50U/mL) bloqueou parcialmente o efeito do EGF, [ct=100%; EGF(0,1ng/mL)=306,5±20,8; IL-4(50U/mL)=125,8±9,8; IL-4+EGF=176,4±9,6; n=7]. Pelas análises morfológicas das culturas tratadas com FGFb e EGF, a glia de Müller é a célula que apresenta o maior perfil proliferativo. Ao analisarmos o perfil de expressão pós-natal do FGFb observamos um aumento ao longo do desenvolvimento (P0=7602±498 Unidades arbitrárias(ua) n=2; P7=9352±486,6 n=3; P14=13436±365,9 n=3; P30=22949±824 n=2 e 1ano=28163±1498 n=2. Conclusão: Nossos dados sugerem um importante papel da IL-4 no controle da responsividade das células da retina ao FGFb e ao EGF. A IL-4 induz um efeito dual sobre a proliferação celular indicando um importante papel desta citocina ao longo do desenvolvimento.