Resumo

Objetivos: Neste trabalho investigamos o perfil de atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica ao longo do desenvolvimento do sistema nervoso de ratos pigmentados, além de analisar o papel de possíveis reguladores na modulação da atividade desta enzima na retina. Métodos: Córtex cerebral e retinas de ratos Lister Hooded de diferentes idades pós-natais (P0, P1, P7, P14, P30 e P90) foram removidos e homogeneizados em solução tampão. Após centrifugação (1.500g), o sobrenadante foi utilizado para medir a atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica, determinada pela diferença entre o Pi liberado na ausência e na presença de 1mM ouabaína. Nos experimentos com inibidores, após dissecção, as retinas foram incubadas por 1 hora, em meio de cultura completo, à 37°C, com 10 μM de IOME (inibidor do receptor de IGF), 25 μM de Ly (inibidor da Pi3 Kinase) e 1 μM de PP1 (inibidor da SRC). Após este período procedeu-se a homogeneização. Para analisarmos a expressão de proteínas utilizamos a técnica de Western blot. Nossos resultados demonstram que a atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica em homogeneizados de cérebro de ratos com menos de 1 dia de nascimento (P0), é de 37±2 nanomoles Pi.mg^-1.min^-1, e que essa atividade não aumenta de modo significativo nas idades de P1 e P7. No entanto, em P14, a atividade aumenta cerca de três vezes (139±12 nanomoles Pi.mg^-1.min^-1). Em homogeneizados de retina, a atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica de animais P1, 62±8 nanomoles Pi.mg^-1.min^-1, praticamente dobra na idade P7 (119±3 nanomoles Pi.mg^-1.min^-1). Em animais P14, a atividade aumenta ainda mais (178±11 nanomoles Pi.mg^-1.min^-1), atingindo praticamente três vezes o valor observado em animais P1. A incubação com IOME, 10 μM, leva a uma inibição de aproximadamente 30% da atividade na retina de animais P7 quando comparado ao controle. No entanto, o tratamento com Ly 25 μM e PP1 1 μM demonstram uma inibição da atividade por volta de 43% e 44%, respectivamente, em retinas de animais P7. Paralelamente, avaliamos os níveis das subunidades catalíticas da (Na⁺/K⁺)-ATPase ao longo do desenvolvimento da retina, onde observamos a expressão de α1 [P0= 15150±1689 Unidades Arbitrárias (UA); P4= 23095±1681 UA; P7= 17011±1859 UA; P14= 17687±2576 UA; P30= 10238±2069 UA] e expressão de α3 [P0= 19922±1455 UA; P4= 12225±3553 UA; P7= 16502± 2210 UA; P14= 18095± 1963 UA; P30= 21456± 1734 UA]. Conclusões: Os dados obtidos com córtex cerebral e retina sugerem que o aumento da atividade observado até o 14° dia pode estar correlacionado com a diferenciação cortical e retiniana. À medida que o tecido vai sofrendo seu processo de diferenciação, há um aumento da atividade elétrica e, consequentemente, um aumento da atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica, como observado. Nossos dados, ainda preliminares, demonstram que o IGF, e as vias da Pi3 Kinase e da SRC podem desempenhar um papel regulatório sobre atividade, visto que estes levaram à diminuição da atividade em retina de animais P7. Além disso, as alterações na atividade (Na⁺/K⁺)-ATPásica parecem não corresponder as variações nos níveis de expressão das subunidades catalíticas α1 e α3, sugerindo envolvimento de mecanismos regulatórios sobre a atividade da enzima.