Resumo

Objetivo:Avaliar a via de sinalização da fosfolipase A2 (PLA2) isolada do veneno da serpente Lachesis muta, na sobrevida das células ganglionares (CG) da retina de rato, submetidas à axotomia. Métodos e Resultados: Para identificação das CG, ratos neonatos receberam injeções de peroxidase (HRP) em ambos colículos superiores. Após 16h os animais foram sacrificados, suas retinas dissecadas, dissociadas e plaqueadas (100000céls/cm2) em meio de cultura completo (MCC). As culturas foram mantidas por 4h em MCC e a seguir algumas lamínulas foram fixadas em aldeídos (100% da população de CG). As demais culturas foram tratadas e mantidas por 48h quando então foram fixadas. A presença de HRP foi revelada por reação histoquímica utilizando-se tetrametilbenzidina como cromógeno. O número de CG foi obtido por contagem em microscopia de campo claro. Os resultados mostram que o tratamento com PLA2 aumenta a sobrevida das CG de forma dose-dependente, sendo a melhor concentração a de 5μg [CT48h=53,6% e=4,0%; PLA2 2,5μg=5,5% e=3,7%;PLA2 5,0μg= 84,4%e=2,5%; PLA2 10μg=70,3% e=2,8%; PLA2 50μg=45,5 e=3,3% n=7]. A hidrólise de fosfolipídeos pela PLA2 produz lisofosfatidilcolina (LPC). Por este motivo, investigamos o papel do LPC na sobrevida das células ganglionares. Nossos resultados demonstram um efeito trófico deste lipídeo, sendo a melhor concentração de 10μM [CT48h=57,1% e=2,6%; LPC 1μM=53,5% e=1,9%;LPC 5μM= 61,9%e=2,8%; LPC 10μM=91,0% e=1,9%; LPC 25μM=47,4 e=3,4%, LPC 50μM=29,1% e=4,1% n=6]. O tratamento com inibidor da PKC delta rottlerina 4μM(Rot) aboliu totalmente tanto a ação da PLA2 [CT48h=53,9% e=2,4%; PLA2 10μg=92,9% e=2,3%;Rot= 57,3%e=1,7%;PLA2+Rot=44,4 e=3,4% n=7] como a do LPC 10μM [CT48h=45,7% e=2,6%; LPC=95,5% e=2,9%; Rot=50,7% e=1,6%; LPC+Rot=43,5% e=1,6%, n=5]. Os inibidores das vias da PI3 kinase (Ly294002-25μM)[CT48h=45,7% e=2,6%; LPC=95,5% e=2,9%; Ly=50,7% e=0,9%; LPC+Ly=95,4% e=2,4%, n=4] e da MEK(PD98059-50μM) também não aboliram o efeito do LPC[CT48h=45,7% e=2,6%; LPC=95,5% e=2,9%; PD=61,5% e=3,6%; LPC+PD=91,7%e=2,6%]. Conclusão: Nossos resultados sugerem que o efeito trófico da PLA2, na população de CG, seja mediado pelo seu produto de hidrólise LPC. Esse resultado indica um papel importante deste lipídeo na manutenção da sobrevida neuronal.