SBNeC 2010
Resumo:F.025


Poster (Painel)
F.025OSCILAÇÃO CIRDADIANA DA EXPRESSÃO E DA ATIVIDADE DA SINTASE NEURONAL DE ÓXIDO NITRICO (nNOS) NO HIPOCAMPO DE POMBOS (C. livia)
Autores:Aline Vilar da Silva Machado (UNICAMP - Universidade Estadual de Campinas) ; André Schwambach Vieira (UNICAMP - Universidade Estadual de Campinas) ; Simone Aparecida Teixeira (USP - Universidade de São Paulo) ; Marcelo Nicolás Muscará (USP - Universidade de São Paulo) ; Elenice Aparecida de Moraes Ferrari (UNICAMP - Universidade Estadual de Campinas)

Resumo

[OBJETIVOS] Os objetivos do presente estudo são a investigação da oscilação circadiana na expressão da sintase neuronal de óxido nítrico (nNOS) e da atividade da sintase de óxido nítrico dependente de Ca2+ no hipocampo de pombos e identificação dos pontos de máxima e mínima expressão e atividade da proteína durante o período de 24 h. [MATERIAIS E MÉTODOS] A expressão da nNOS e da NOS dependente de Ca2+ foram analisadas em seis horários diferentes para detectar a oscilação circadiana. Um total de 24 pombos machos foram atribuídos a seis grupos: ZT00, ZT04, ZT08, ZT12, ZT16, ZT20, em cada experimento. Os animais foram adaptados no fotoperíodo 12:12h claro/escuro durante 15 dias, e em seguida, expostos ao fotoperíodo esqueleto. O tecido hipocampal dos animais foi processado de acordo com os métodos para análise semi-quantitativa de Western Blotting e de atividade enzimática para NOS dependente de Ca2+. A análise óptica das bandas imunorreativas ao anticorpo contra nNOS produzido em coelho (NOS1 (R-20); sc-648, Santa Cruz Biotechonoly, INC.) foi determinada por meio da densitometria digital (Scion Image Software). A atividade enzimática foi determinada pela quantidade de L-citrulina produzida por minuto e por micrograma de proteína na reação. Os dados de densitometria óptica e da atividade enzimática foram submetidos ao ajuste à curva cosseno (método do Cosinor) com o período de 24hs (Cosana, 1994) e foram analisados por meio do teste ANOVA de uma via, tendo horário como fator. O teste Tukey-Kramer foi utilizado para múltiplas comparações post hoc. [RESULTADOS] Os valores fornecidos para o ajuste senoidal da curva de expressão protéica foram 9h50 ± 38 min para a acrofase, 22h50 min ± 38 min para a batifase, 0,24 ± 0,07 para a amplitude, 0,77 ± 0,13 mesor, 67,57% porcentagem rítmica. Para a atividade catalítica os valores foram 10h ± 50 min para a acrofase, 22h ± 50 min para batifase, 1,22 ± 0,65 para a amplitude, 1,56 ± 0,11 de mesor, 96,03% de porcentagem rítmica. As análises dos dados da expressão protéica e atividade catalítica evidenciaram a presença de ritmicidade circadiana significativa (teste do Cosinor, p < 0,05). A relação de fase entre as curvas de expressão protéica da nNOS e a atividade catalítica da NOS dependente de Ca2+ é de 10 minutos. As médias da densitometria óptica dos grupos referentes aos horários mais próximos da acrofase - ZT04-10hs (0,944 ± 0,12) e a batifase - ZT16-22hs (0,572 ± 0,16) foram significativamente diferentes (F (5,18) p < 0,0001). [CONCLUSÕES] Foi possível comprovar que a expressão e a atividade enzimática da sintase neuronal de óxido nítrico no hipocampo de pombos apresenta uma variação circadiana. Experimentos posteriores irão verificar a correlação dessa variação circadiana e o condicionamento aversivo ao contexto, realizando os testes nos horários de máxima e mínima expressão da proteína.


Palavras-chave:  ritmicidade circadiana, condicionamento aversivo ao contexto, sintase de óxido nítrico, hipocampo, consolidação