Resumo

OBJETIVOS: O objetivo do nosso trabalho foi analisar o efeito da Interleucina-13 (IL-13) na sobrevida das células ganglionares (CG) mantidas em cultura e as possíveis vias de sinalização envolvidas neste processo. MÉTODO: Ratos Lister Hooded recém nascidos receberam injeções de HRP (30% em DMSO 2%) nos colículos superiores. Após 16 horas, os animais foram sacrificados, suas retinas dissecadas em solução salina sem cálcio e magnésio, dissociadas química e mecanicamente e plaqueadas em lamínulas tratadas previamente com p-L-o 25μg/mL, na densidade de 125.000 cél/cm2. As culturas foram mantidas por 4h em meio de cultura completo e após este período as lamínulas controle 4h, que correspondem a 100% da população de CG (±1000 céls/placa), foram fixadas em aldeídos. As demais receberam tratamento com IL-13 e/ou as drogas. Após 48h em cultura as lamínulas foram fixadas e a revelação da HRP foi feita por reação histoquímica, que utiliza a TMB como cromógeno. O n° de CG foi obtido por contagem em microscopia de campo claro com aumento de 400X. RESULTADOS: Nossos resultados mostram que o tratamento com a IL-13, em diferentes concentrações, aumenta a sobrevida das CG sendo o melhor efeito obtido com 5ng/mL [ct48h=53,5% ± 5,6%, IL-13: (0,1ng/mL)=72,18% ± 4,43%, (1ng/mL)=85% ± 2,83%, (2ng/mL)=86,3% ± 2,50%, (5ng/mL)=93,81% ± 1,5%, (10ng/mL)=92,12% ± 1,77% (n=8)]. Analisando a participação das possíveis vias ativadas pela IL-13, observamos que o PP1, 1μM (inibidor da Src) (ct48h=57,92% ± 3,39%, PP1=54,25% ± 5,76%, IL-13=93,31% ± 0,78%, IL-13+PP1=59.21% ± 2,29%, n=8 e o SB, 20μM (Inibidor da P38) (ct48h=60,32% ± 1,94%, SB=60,24% ± 5,34%, IL-13=89,75% ± 1,62%, IL-13+SB=60,31% ± 2,35%, n=10) aboliram o efeito da IL-13. Porém o H89, 1μM (inibidor da PKA) (ct48h=60,87% ± 6,02%, H89=51,5% ± 1,5%, IL-13=92,9% ± 1,77%, IL-13+H89=90,37% ± 3,9%, n=8), o iJNK, 1μM (Inibidor da JNK) (ct48h=62,59% ± 2,52%, iJNK=62,01% ± 2,10%, IL-13=90,13% ± 1,99%, IL-13+iJNK=86,95% ± 2,64%, n=7) e o PD, 50μM (Inibidor da Erk) (ct48h=62,9% ± 0,8%, PD=65,28% ± 2,44%, IL-13=90,97% ± 2,49%, IL-13+PD=92,45% ± 2,77%, n=8) não alteraram o efeito da IL-13. CONCLUSÃO: Nossos resultados demonstram que a IL-13 desempenha um papel neuroprotetor sobre a população de células ganglionares, sendo este efeito mediado pela via da Src e p38, por outro lado mostram o não envolvimento das proteínas JNK e a ERK.