SBNeC 2010
Resumo:B.047


Poster (Painel)
B.047ESTUDO COMPARATIVO DO EFEITO TRÓFICO DA INTERLEUCINA-4 E DA INTERLEUCINA-13 NA SOBREVIDA DAS CÉLULAS GANGLIONARES DA RETINA DE RATOS NEONATOS EM CULTURA
Autores:Raphael Monteiro de Oliveira (UFF - Universidade Federal Fluminense) ; Gabriela Velozo Gomes dos Santos (UFF - Universidade Federal Fluminense) ; Elisabeth Giestal de Araujo (UFF - Universidade Federal Fluminense)

Resumo

OBJETIVOS: O objetivo do nosso trabalho foi analisar e comparar as vias de sinalização desencadeadas pela Interleucina-4 (IL-4) e Interleucina-13 (IL-13) na sobrevida das células ganglionares (CG) mantidas em cultura, uma vez que, as duas citocinas, apresentam efeitos neuroprotetores e a literatura revela a capacidade de ativarem um receptor em comum. MÉTODO: Ratos Lister Hooded recém nascidos receberam injeções de HRP (30% em DMSO 2%) nos colículos superiores. Após 16 horas, os animais foram sacrificados, suas retinas dissecadas em solução salina sem cálcio e magnésio, dissociadas química e mecanicamente e plaqueadas em lamínulas tratadas previamente com p-L-o 25μg/mL, na densidade de 125.000 cél/cm2. As culturas foram mantidas por 4h em meio de cultura completo e após este período as lamínulas controle 4h, que correspondem a 100% da população de CG (±1000 céls/placa), foram fixadas em aldeídos. As demais receberam tratamento com IL-13 ou IL-4 e/ou as drogas. Após 48h em cultura as lamínulas foram fixadas e a revelação da HRP foi feita por reação histoquímica, que utiliza a TMB como cromógeno. O n° de CG foi obtido por contagem em microscopia de campo claro com aumento de 400X. RESULTADOS: Analisando, primeiramente, a participação das possíveis vias ativadas pela IL-13, observamos que o Ly, 25μM (inibidor da PI3-cinase) (ct48h=60,32% ± 1,94%, Ly=60,57% ± 3,43%, IL-13=89,75% ± 1,62%, IL-13+Ly=88,19% ±4,82%, n=9) e o iJak3, 80μM (Inibidor da Jak3) (ct48h=60,73% ± 2,74%, iJAK3=58,16% ± 3,73%, IL-13=91,67% ± 1,30%, IL-13+iJAK3=87,3% ± 2,70%, n=8) não aboliram o efeito da IL-13, porém o cloreto de queleritrina, 1,25μM (inibidor da PKC) (ct48h=56,96% ± 1,59%, CC=54,22% ± 3,93%, IL-13=90,82% ± 1,82%, IL-13+CC=59,97% ± 2,94%, n=8), o BAPTA-AM, 5μM (quelante intracelular de Ca+) (ct48h=58,4% ± 1,89%, Bapta=53,24% ± 1,62%, IL-13=91,82% ± 2,13%, IL-13+Bapta=49,14% ± 2,48%, n=9) e o K252a, 50nM (Inibidor dos receptores Trk) (ct48h=59,83% ± 1,33%, K252a=59,62% ± 2,15%, IL-13=91,17% ± 2,67%, IL-13+K252a=61,65% ± 1,76%, n=7) inibiram o efeito da IL-13. Por outro lado, os inibidores utilizados com a IL-13, na mesma concentração, foram capazes de abolir o efeito da IL-4 (ct48h=60,5% ± 2,02%, Ly=60,57% ± 3,43%, IL-4=88,48% ±1,61%, IL-4+Ly=58,85% ± 1,40%, n=7) (ct48h=59% ± 1,47%, iJAK3=56,28% ± 3,03%, IL-4=93,02% ± 2,06%, IL-4+iJAK3=60,5% ± 2,53%, n=10) (ct48h=61,3% ± 1,54%, CC=54,22% ± 3,93%, IL-4=85,93% ± 1,27%, IL-4+CC=57,28% ± 2,33%, n=7) (ct48h=62,14% ± 1,02%, Bapta=53,24% ± 1,62%, IL-4=93,11% ± 1,74%, IL-4+Bapta=57,5% ± 2,78%, n=9) (ct48h=48,76% ± 2,54%, K252a=50,27% ± 1,39%, IL-4=98,3% ± 0,67%, IL-4+K252a=53,03% ± 1,59%, n=8) CONCLUSÃO: Nossos resultados demonstram que as vias desencadeadas pela IL-4 e IL-13 apresentam pontos de convergência, como a PKC, os receptores Trk e o aumento intracelular de Ca+2. Entretanto a estimulação com as interleucinas levam à ativação de receptores diferentes pois o inibidor da Jak3 somente inibiu o efeito da IL-4.


Palavras-chave:  Axotomia, Células ganglionares, IL-13, IL-4, Sobrevida